隨著對(duì)中間體和zui終化合物的反相快速色譜的需求增加，合成化學(xué)家提出了一個(gè)有趣的問題。從歷史上看，正相快速色譜一直是合成中間體的“首 選”純化工具。然而，今天，中間體和zui終產(chǎn)品越來越兩極分化。這些極性反應(yīng)混合物在使用正相（二氧化硅）進(jìn)行分離和回收時(shí)都面臨純化挑戰(zhàn)，因此需要使用反相快速色譜法。
對(duì)于不熟悉該技術(shù)的人來說，反相色譜使用填充有疏水固定相的色譜柱。反相使用的溶劑通常與水混溶，常用的是甲醇和乙腈。其他不太受歡迎的反相溶劑包括四氫呋喃和丙酮。
雖然正相允許使用具有不同選擇性選項(xiàng)的多種溶劑，但反相是有限的。話雖如此，當(dāng)改變有機(jī)溶劑時(shí)，有時(shí)會(huì)在反相中看到選擇性差異，這可以改善某些化合物的分離——這是本文的主要關(guān)注點(diǎn)。
決定使用甲醇或乙腈的其他變量包括……
- 成本
- 粘度
- 紫外線吸收
成本
如果您曾經(jīng)購買過溶劑，您可能已經(jīng)注意到，甲醇比乙腈便宜得多，便宜 4 倍，這當(dāng)然是證明其用于日常反相快速色譜的一個(gè)令人信服的理由。
雖然節(jié)省溶劑費(fèi)用是有道理的，但還應(yīng)考慮上述其他參數(shù)。
粘度
水是極性的并且相當(dāng)粘稠，至少與大多數(shù)溶劑相比是這樣。當(dāng)與其他溶劑混合時(shí)，粘度會(huì)隨著有機(jī)物的增加（高達(dá)約 50%）而增加，這反過來又會(huì)提高背壓，圖 1。
隨著有機(jī)溶劑百分比增加超過50%，粘度和壓力會(huì)降低。這很重要，因?yàn)樵诳焖偌兓^程中增加壓力會(huì)限制流速、增加純化時(shí)間，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)超壓。如果這是一個(gè)問題，乙腈會(huì)是更好的選擇。
圖 1. 壓力與水中有機(jī)溶劑的百分比。當(dāng)每種溶劑的有機(jī)百分比接近50%時(shí)，壓力達(dá)到zui大值。
紫外線吸收
大多數(shù)溶劑在一定程度上吸收紫外線。然而，水和乙腈在198nm以上是完全紫外線透明的，這是大多數(shù)商業(yè)光系統(tǒng)紫外線檢測(cè)器的下限。甲醇、四氫呋喃和丙酮都會(huì)吸收且阻礙化合物檢測(cè)的紫外光。
選擇性
在評(píng)估不同的溶劑混合物時(shí)，并非所有化合物都會(huì)顯示出改變的洗脫模式。但是，如果您發(fā)現(xiàn)有一對(duì)化合物在一種溶劑中的分離效果不佳，何不快速評(píng)估另一種溶劑呢？
為了幫助說明評(píng)估不同溶劑所帶來的好處，我舉了一個(gè)特別有趣的例子。被純化的粗物質(zhì)是一種天然產(chǎn)物提取物，我嘗試首先使用反相和60-100%甲醇-水梯度進(jìn)行純化，圖 2。
該梯度提供了四種zui豐富的化合物的一些分離，但無法完全分離，使用 Biotage Isolera Dalton 2000 快速系統(tǒng)和12克Biotage Sf?r C18色譜柱將一種 +m/z 為 302.8 的化合物與另一種 +m/z 為 272.8 的化合物進(jìn)行分析。 
圖 2. 使用水-甲醇梯度的反相純化。在線質(zhì)量檢測(cè)器證實(shí)了 +m/z 272.8 和 +m/z 302.8（粉紅色峰）的化合物未完全分離。
為了改進(jìn)色譜，我將甲醇換成乙腈，并運(yùn)行 40-100% 的乙腈-水梯度。令我高興的是，乙腈提供了不同的選擇性，在 +m/z 272.8 的化合物之前洗脫了 +m/z 302.8 的化合物，并產(chǎn)生了更好的整體分離，圖 3。 
圖 3. 使用水-乙腈梯度對(duì)天然產(chǎn)物提取物進(jìn)行反相純化改變了洗脫順序并改進(jìn)了純化?，F(xiàn)在，具有 +m/z 302.8（藍(lán)色峰）的化合物比具有 +m/z 272.8（黃色峰）的化合物更早流出。
該數(shù)據(jù)是否表明乙腈應(yīng)該是反相中的首 選溶劑？不，盡管它確實(shí)支持在創(chuàng)建反相快速純化方法時(shí)應(yīng)評(píng)估甲醇和乙腈的建議。
