[色譜柱的使用]如何快速新建中藥配方顆粒的指紋圖譜液相方法?

今天，小編就結(jié)合實(shí)際案例跟大家分享如何快速新建指紋譜圖液相分析方法。

圖1. 中藥配方顆粒推薦色譜柱

指紋/特征圖譜粗篩色譜條件

(UPLC方法)

圖2. 梯度表

按照如上色譜條件，將提取的配方顆粒樣品集中進(jìn)樣，結(jié)果如下：

圖3. 在ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱上進(jìn)行樣品粗篩

 從譜圖可見：

• S1、S2、S3、S5、S6中組分少，峰形對稱，可在此基礎(chǔ)上優(yōu)化梯度；

• S4、S7、S8組分復(fù)雜，先調(diào)整梯度，使峰均勻分布后，再考察色譜柱、柱溫、流速等對分離效果的影響。

  優(yōu)化案例一：升麻

   調(diào)整洗脫梯度，使峰分布更均勻。

圖4. 升麻優(yōu)化結(jié)果

  優(yōu)化案例二：旋覆花

• Step1：優(yōu)化梯度，使峰均勻分布

圖5. 旋覆花-梯度優(yōu)化

• Step2：考察添加劑濃度

圖6. 旋覆花-添加劑濃度對分離的影響

• Step3：篩選色譜柱

圖7. 旋覆花-色譜柱對分離的影響

• Step4：確定色譜條件，如有必要可繼續(xù)優(yōu)化。

圖8. 旋覆花在BEH Shield RP18色譜柱上的分析結(jié)果

指紋/特征圖譜粗篩色譜條件

(HPLC方法)

• 儀器：ACQUITY Arc

• 色譜柱：CORTECS T3，2.7μm，4.6×150 mm（PN:186008495）

• 流動相A：0.1%磷酸  

• 流動相B：乙腈

• 流速：1.0 mL/min

• 波長：205 nm+全波長         

• 柱溫：30度

• 進(jìn)樣量：5 μL

圖9. 梯度表

按照上述條件粗篩樣品，再按照上文中的方式優(yōu)化條件即可。

圖10. 在CORTECS T3色譜柱上進(jìn)行樣品粗篩

總結(jié)

綜上，在ACQUITY UPLC HSS T3/CORTECS T3色譜柱上，使用大梯度粗篩，可以快速判斷樣品的整體峰分布。對簡單樣品通過梯度優(yōu)化即可得到滿意譜圖，但對復(fù)雜樣品，除梯度優(yōu)化，還需要考察色譜柱不同鍵合相及規(guī)格、添加劑濃度及種類、柱溫、流速等條件對分離結(jié)果的影響，才可以獲得一個(gè)滿意的結(jié)果。

注：本文分享自【沃特世技術(shù)服務(wù)】公眾號。