分析中使用的不同類型的HPLC色譜柱

色譜柱是HPLC的主要成分，因為色譜柱負責(zé)分離樣品成分。樣品與流動相一起通過色譜柱，從色譜柱中分離出其組分。
通常，硅膠填充在高效液相色譜柱中，因為其粒徑和孔隙率有助于成分分離，并且硅膠也是一種惰性材料，不會與流動相發(fā)生反應(yīng)。因此，硅膠柱可用于分析不同化學(xué)性質(zhì)的化合物。填充在HPLC柱中的物質(zhì)稱為固定相。

高效液相色譜柱及其分離技術(shù)

根據(jù)色譜柱的組成和分離方法，有不同類型的色譜柱。這里描述了其中的一些。
1）正相柱
2）反相柱
3）離子交換柱
4）大小排除列

1）正相高效液相色譜柱：
這種色譜柱的極性固定相比流動相多。色譜柱的填料應(yīng)比流動相更具極性，且該條件由極性材料二氧化硅實現(xiàn)。但水的極性比二氧化硅強，因此不使用水，而使用二氯甲烷、己烷和氯仿或它們與乙醚的混合物作為流動相。
樣品組分的分離基于樣品組分的極性。極性越高的樣品組分與極性固定相的相互作用越大，導(dǎo)致與極性較低的流動相相互作用的極性較小的組分分離。硅膠柱廣泛應(yīng)用于藥物分析。使用正相色譜柱的色譜柱填料稱為正相色譜。
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2）反相高效液相色譜柱：
在名稱所述的反向相位列中，它與正常相位列相反。與極性較高的流動相相比，它具有非極性或極性較低的固定相。在反相色譜柱中，鍵合烴（如C8和C18）和其他非極性烴用作固定相，而有機水溶液（如水-甲醇或水-乙腈混合物）用作流動相。
反相色譜柱中樣品組分的分離也是基于樣品組分的極性進行的，但其發(fā)生與正相HPLC柱正好相反，因此，這種色譜被稱為反相色譜。

3）離子交換HPLC柱：
使用這些色譜柱分析容易電離的化合物。這些色譜柱中的固定相保持酸性或堿性，帶有正負電荷，而流動相為極性液體，如水溶液中的鹽溶液。分子的分離是基于分子與帶電固定相之間的吸引離子力而發(fā)生的。由于樣品組分分離過程中的離子交換，稱為離子交換色譜法。
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4）尺寸排除HPLC柱：
這些色譜柱中的多孔固定相允許根據(jù)組分的大小進行分離。多糖和二氧化硅等聚合物的組合用作這些色譜柱中的固定相。小分子滲透到固定相的孔隙中，而大分子部分滲透到孔隙中。因此，樣品中的大分子比小分子先洗脫，這種色譜法稱為尺寸排除色譜法。這些色譜柱通常不用于藥物化合物的分析。
HPLC柱的長度不同，從30 mm到250 mm不等，其粒徑或孔隙率為3μ到5μ。這些因素影響樣品分析，因此，在HPLC分析方法開發(fā)過程中，這些因素被認為是重要的。根據(jù)待分析化合物的性質(zhì)和流動相選擇色譜柱。通常在1000次運行后或根據(jù)需要，還應(yīng)不時評估柱性能。

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