中藥配方標(biāo)準(zhǔn)中“水蛭（螞蟥）配方顆粒的檢測(cè)”，使用迪馬色譜柱

【來(lái)源】本品為水蛭科動(dòng)物螞蟥Whitmania pigra Whitman的干燥全體經(jīng)炮制并按標(biāo)準(zhǔn)湯劑的主要質(zhì)量指標(biāo)加工制成的配方顆粒。

【制法】取水蛭（螞蟥）飲片4000g，加水煎煮，濾過(guò)，濾液濃縮成清膏（干浸膏出膏率為12.0%~20.0%），加入輔料適量，干燥（或干燥，粉碎），再加入輔料適量，混勻，制粒，制成1000g，即得。

【性狀】本品為淺灰綠至棕綠色的顆粒；氣微，味酸。

【特征圖譜】照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2020年版四部通則0512）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)    以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長(zhǎng)為250mm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm）；以乙腈-0.2%磷酸（0.5:99.5）為流動(dòng)相；柱溫25℃；流速為每分鐘0.8mL；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按次黃嘌呤峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

參照物溶液的制備    取水蛭（螞蟥）對(duì)照藥材1.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加入水20mL，加熱回流60分鐘，取出，放冷，離心處理（轉(zhuǎn)速10000r/min，時(shí)間10分鐘），取出，取上清液濾過(guò)，作為對(duì)照藥材參照物溶液。另取次黃嘌呤、尿嘧啶對(duì)照品適量，加10%甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品參照物溶液。

供試品溶液的制備    取本品，研細(xì)，取約0.3g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加入水10mL，超聲處理（功率200W，頻率53kHz）10分鐘，取出，放冷，離心處理（轉(zhuǎn)速10000r/min，時(shí)間10分鐘），取出，取上清液濾過(guò)，即得。

測(cè)定法    分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。

供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)5個(gè)特征峰，并應(yīng)與對(duì)照藥材參照物色譜中的5個(gè)特征峰的保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，其中峰2、峰3分別應(yīng)與尿嘧啶、次黃嘌呤參照物峰的保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，與次黃嘌呤參照物相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算峰1、峰4、峰5與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±10%范圍之內(nèi)。規(guī)定值為：0.51（峰1）、1.41（峰4）、1.82（峰5）。